基因重组GLP-1衍生物（6KTP）发酵、纯化及鉴定.docVIP

 基因重组 GLP-1 衍生物（6KTP）发酵、纯 化及鉴定# 王从峰，邹信，冉艳红，李弘剑** 5 10 15 20 25 （暨南大学生命科学技术学院，广州 510632） 摘要：目的：重组 GLP-1 衍生物（6KTP）工程菌进行发酵表达，对发酵产物进行蛋白分离 纯化和鉴定。方法：用 5L 发酵罐进行高密度发酵，超声波破碎菌体后用 Ni-NTA 亲和层析 纯化获得融合蛋白，甲酸水解融合蛋白后用 Ni-NTA 亲和层析和 HPLC 纯化，纯化产物进行 SDS、HPLC 和 MS 分析检测。结果：经分离纯化后获得表达产物，纯度达到 99%， 分子量为 5467，与预期一致。结论：通过发酵、纯化获得了高纯的重组 GLP-1 衍生物（6KTP）， 为研究 6KTP 在治疗型糖尿病中的作用奠定物质基础。 关键词：GLP-1 衍生物；发酵；亲和层析；鉴定 中图分类号：Q74 Fermentation, Purification, Identification of Glucagon-like Peptide-1 Derivate (6KTP) Wang Congfeng, Zou Xin, Ran Yanhong, Li Hongjian (College of Life Science and Technology, Jinan University, GuangZhou 510632) Abstract: Objective: In this paper, the fermentation, purification and identification of GLP-1 derivative 6-KTP protein was conducted. Methods: Fusion protein was acquired after high-density fermentation with 5L fermenter, ultrasonic bacterial fragmentation, Ni-NTA affinity chromatography purification, desalination of a C18 reverse column, rotary steam condensation, low temperature freeze-drying. GLP-1 derivative 6-KTP protein was attained after formic acid chemical hydrolysis of fusion protein, HPLC refinery and identified by SDS, HPLC and mass spectrometry. Results: The expression products acquired after purification was up to 99% purity, with its molecular weight of 5467, the same as predicted. Conclusion: The GLP-1 derivative 6-KTP protein with high purity was produced by fermentation and purification, which set the base for its research on Type Ⅱ diabetes. Keywords: GLP-1 derivatives; Fermentation; Affinity chromatography; Identification 30 0 引言 糖尿病是目前最常见的全球非传染性疾病之一，为全球第四大死亡原因[1-3]。据澳大利 亚贝克 IDI 心脏与糖尿病研究所估计：在 20-79 岁成年人中，2010 年糖尿病患病率为 6.4%， 患病人数为 2.85 亿；到 2030 年，患病率为 7.7%，患病人数将达到 4.39 亿。2010-2030 年间， 35 40 发展中国家和发达国家的成年糖尿病患者人数将分别保持 69%和 20%的高增长率[4]。当前， 众多机构和研究者正加紧进行糖尿病药物的研制工作[5]。 胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1, GLP-1）是目前治疗糖尿病药物研制的新方 向。GLP-1 被体内广泛存在的 DPP- IV 降解，半衰期仅有 1-2min[6]。所以，目前基于 GLP-1 治疗型糖尿病的药物研发思路可集中于开发长效抗 DPP-IV 的 GLP-1 衍生物[5]。 本研究前期设计了新型缓控释 GLP-1 衍生物（6K