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烟草黄瓜花叶病毒一步法RT-PCR检测试剂盒的研制与初步应用1.pdf
烟草科技／Tobacco 病虫害防治／DiseasePestControl 2011年第lO期(总第291期) Science＆Technology 烟草黄瓜花叶病毒一步法RT．PCR检测试剂盒的研制与初步应用 张俊祺1，刘相兵2，罗朝鹏1。杨军“，宋纪真1，尹启生1，宋 浩2 1．中国烟草总公司郑州烟草研究院，郑州高新技术产业开发区枫杨街2号450001 2．湖南中烟工业有限责任公司，长沙市劳动中路426号410007 关键词：黄瓜花叶病毒；RT-PCR；检测试剂盒；特异性；稳定性；灵敏度 摘要：为快速准确地检测烟草黄瓜花叶病毒(CMV)，根据黄瓜花叶病毒基因组序列相对保守区域设计 了一对特异性引物，整合了反转录和PCR反应所需酶和缓冲液，通过反应条件的优化，建立了基于一步 法RT-PCR检测烟叶感染CMV的方法，在此基础上组装了检测试剂盒。进一步分析了该试剂盒的特异 性、稳定性和检测灵敏度。结果表明，该试剂盒具有很强的特异性、良好的重复性和较高的灵敏度(模 板RNA浓度最低达到10ng量级)。初步应用结果显示，在多个烟区采集的病叶样品检测结果均与 ELISA检测结果一致，能够成功检测出cMV。 中图分类号：s432．41文献标识码：A文章编号：1002—0861(2011)10—0065—05 and of RT··PCRKitforDetectionof CMV DevelopmentPreliminaryApplicationOne·-step Tobacco ZHANG JUN—Q1(1)，LIUXIANG—BING(2)，LUO JI—ZHEN ZHAO-PENG(1)，YANGJUN(1)，SONG SONG (I)，YINQI—SHENG(1)，andHAO(2) TobaccoResearchInstituteof 45000 1．Zhengzhou CNTC，Zhengzhou1，China 2．ChinaTobaccoHunanIndustrial 410007，China Co．，Ltd．，Changsha mosaic Keywords：Cucumbervirus(CMV)；RT—PCR；Detection detecttobaccoCMV and of was to Abstract：To quicklyaccurately，apairspecificprimersdesignedaccording the conservativeintheCMV for andbuffersneededreverse relatively region genomie enzymes sequence，and andPCRwere reaction methodfor CMV— transcription integrated．Byoptimizing conditions，a detecting infectedtobaccobasedon and RT—PCRwas adetectionkitwasassembled．The one—step developed specificity， and ofthekitwere resultsshowedthatthekitfeatured stabilitysensitivity analyzed．The
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