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高效液相色谱仪维护培训讲义 液相系统维护流程图 日常维护 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 现象：管路中不断有气泡生成 措施：1.用5％～20％的稀硝酸溶液，超声波清洗，再用蒸馏水清洗 2.堵塞严重时,分别按下面的顺序超声波清洗: 水→异丙醇→水→ 5％～20％的稀硝酸溶液→水 注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断 日常维护 单向阀 日常维护 日常维护 故障1：宝石球粘附于垫片 现象：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压， 使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中， 用超声波清洗 日常维护 故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 现象：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超 声波清洗 日常维护 故障：密封圈磨损而导致 密封不良 现象：系统压力波动大或 漏夜 措施：更换密封圈 注意点： 更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （P－SET） 日常维护 故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压 力偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清 洗 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力0.3MPa，则可能堵塞。先确认排液阀打开状态压力为零。 日常维护 日常维护 故障：样品池污染 现象：样品池和参比池能量相差较大 检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPL EN和 REF EN，如两者相差较大，则样品池受污。 措施：1.轻微污染时,用针筒注入异丙醇，清洗样品池; 2.如污染严重， 拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。 日常维护 2.手动进样器 交叉污染的原因 手动进样法 普通方法 1. 在进样(Inject)状态下清洗针口 2. 将扳手切到装填(Load)状态下插入微量注射器 3. 注入样品 4. 将扳手切到进样(Inject)状态 5. 抽针、清洗针口 手动进样法 便捷方法 1. 在进样(Inject)状态下插入微量注射器 2. 将扳手切到装填(Load)状态 3. 注入样品 4. 将扳手切回到进样(Inject)状态 5. 抽针、清洗针口 日常维护 操作注意点： 1）插针应插到底 2）进样应使用液相色谱专用平头进样针 3）清洗应使用专用针口清洗器 3.有机溶剂的优与劣 什么时候需要“HPLC”级有机溶剂 1. 等浓度洗脱法的微量分析 用光谱进行判断 2. 梯度洗脱法分析 3.1 等浓度洗脱法的微量分析 3.2 梯度洗脱法分析 3.3 梯度洗脱法的注意点 1.流动相使用HPLC级有机溶剂。 2.查看空白实验的数据。 3.遵守分析周期。 （最初的分析数据不采用） 4.谈谈缓冲液 注意点 选择缓冲液注意 1 .确定最佳分离状态时的流动相pH值 (pH酸度计校验了吗?) 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 （即使浓度稀也具有较强的缓冲能力） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液） 代表性弱酸的pKa pK1 pK2 pK3 醋酸 4.87 柠檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32 注意点 (1).现配现用. (配制时注意前后的pH值一样) (2).工作完毕后及时冲洗LC系统 (常用的ODS柱怎么冲洗?)(3).梯度洗脱时,确认了缓冲液与有机溶剂的混合没问题了吗? * 用不完,舍不得倒掉;放冰箱,能放几天? 5.关于脱气 脱气的目的 1. 防止由气泡的产生引起的故障