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方法学评价.ppt
方法学评价 董雷鸣 * 方法学评价 ——通过一系列的实验，对某一实验方法作出客观的评价。 方法学评价试验 ——线性范围试验 ——批内重复试验 ——回收试验 ——干扰试验 ——方法比较试验 ——检测能力试验 评价对象 ——葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）。 GOD-POD法评价之 线性范围试验 光谱分析—Beer定律： ——溶液的吸光度与溶液浓度成正比。 A=a?b?c 吸光度A 浓度C 0 吸光度 吸光系数 液层厚度 溶液浓度 A C 偏离 仪器偏离 化学偏离 线性误差 线性检查 仪器线性检查 方法学线性检查 仪器偏离 化学偏离 ——杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件变化、波长的变化、比色杯误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等 ——有色物质的电离、水解、缔合等原因。 线性范围试验目的： ——通过进行线性范围的测定，选择线性段作为该测定方法的分析范围。 tanθ＝A1/C1＝A2/C2＝A3/C3＝……＝An/Cn＝K A C 线性段 θ 校正常数 原理： 使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法测定各吸光度，绘制剂量-反应曲线（dose-responses curve）。 GOD-POD法原理： 葡萄糖氧化酶(GOD) 葡萄糖 + O2 葡萄糖酸 + H2O2 H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 醌类 + H2O+O2 过氧化物酶(POD) （色原性氧受体） 试剂： 40mmol/L葡萄糖标准溶液 GOD-POD法相关试剂 操作： 1500 1500 1500 1500 1500 1500 GOD-POD试剂 0 2 4 6 8 10 蒸馏水 10 8 6 4 2 0 葡萄糖标准液 5 4 3 2 1 0 标准管 加入物（μl） 血糖与GOD-POD试剂剂量反应曲线的制作 混匀，置37℃水浴，15min，505nm比色。 注意事项： 1、葡萄糖标准液的加量必须十分准确。 2、标准管系列中每管平行做3管，取平均值。 3、本方法的线性可达22.24mmol/L。 *
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