以重组PvpA蛋白作为抗原的鸡毒支原体抗体间接ELISA检测方法的建立.pdf

第 33卷 第 9期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．33．NO．9 2011年 9 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Sep． 2011 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．09．11 以重组 PvpA蛋白作为抗原的鸡毒支原体 抗体间接 ELISA检测方法的建立 周云雷 ，李 健 ，魏飞龙，张小华，蒋红霞 (华南农业大学 兽医学院 ／广东省兽药研制与安全评价重点实验室，广东 广州 510642) 摘 要：为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接 ELISA检测方法，本研究以原核表达的PvpA蛋白作 为包被抗原，初步建立 了检测MG抗体 的间接 ELISA检测方法。特异性试验结果表 明，重组 PvpA蛋 白与鸡新城 疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大肠杆菌 “0”抗原、禽沙 门氏菌 “0”抗原阳性血清均不发生 交叉反应。该方法的批 内变异系数小于8％，批间变异系数小于 1l％，表明具有较好的重复性。采用该检测方 法与进 口试剂盒对不同省份送检的鸡血清进行检测比较，两者阳性和阴性符合率均达到90％以上。本研究建立 的间接 ELISA检测方法为 MG抗体检测试剂盒的研制奠定 了基础 。 关键词：鸡毒支原体；pvpA；原核表达；间接 ELISA 中图分类号 ：$852．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2011)090713．05 DevelopmentofanindirectELISA for detectingantibodiesagainstMycoplasmagallisepticum basedonrecombinantPvpA protein ZHOU Yun—lei，LIJian，W EIFei—long，ZHANG Xiao—hua，JIANG Hong—xia (CollegeofVeterinaryMedicine，GuangdongKeyLaboratoryforVeterinaryDrugDevelopmentandSafetyEvaluation SouthChinaAgriculturalUniversiyt，Guangzhou510642，China) Abstract：Inthisstudy，anindirectEL1SA fordetectingantibodiesagainstMycoplasmagallisepticum wasestablishedbased onthepurifiedcytadhesinproteinPvpA expressedinE．coliascoatingantigen．TheindirectELISA showednocrossreactionwith thepositiveserum ofNewcastlediseasevirus，Infectiousbronchitisvirus，M．synoviae，E．coli(0)andSalmonella(0)．The variationcoefficientwaslessthan8％ ofrintro．batchand1essthan 11％ ofrinter—batch．ContordanceoftheindirectELISA relative tocommercialMycoplasmaGallisepticum AntibodyKitwasabove90％ ．TheresultsindicatedthattheindirectELISA couldbe usedofrthediagnosisandepidemiologicalsurveysofM ．Gallisepticum infection． Keywords：Mycoplasmagallisepticum ；pvpA gene